OCT包埋剂在冰冻切片实验中的作用和使用方法
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OCT包埋剂在冰冻切片实验中的作用和使用方法
浏览次数：643 发布日期：2025-11-10
来源：本站 仅供参考，谢绝转载，否则责任自负
在免疫组化、组织病理研究等科研场景中，冰冻切片是常用实验步骤。而要获得完整、平整的组织切片，OCT 包埋剂是关键辅助试剂。
一、先搞懂：OCT 包埋剂到底是什么？
1. 基础定义
OCT 包埋剂英文全称为 “optimal cutting temperature compound”（最佳切割温度复合物），是一种可在低温环境下支撑组织、辅助组织顺利完成切片的水溶性保护剂。
其核心成分为聚乙二醇与聚乙烯醇，二者混合后具备双重特性：一方面具有一定硬度，可对组织形成支撑；另一方面具有水溶性，不会对后续实验造成干扰，能保障切片过程中组织的完整性，减少皱折与碎裂。
2. 关键特性
水溶性：这是其核心优势。切片完成后，经水漂洗操作，OCT 包埋剂可完全溶解，不会在组织表面残留，能避免后续染色步骤中出现背景污染，提升实验结果准确性。
低温硬度：在冰冻切片常用的低温环境（如 -22℃）中，OCT 包埋剂会呈现一定硬度，可对柔软组织形成有效支撑，使切片机能够切出厚度均匀的薄片（常规厚度为 10μm）。
室温操作性：在室温条件下，OCT 包埋剂呈黏稠液体状态，可充分浸润组织，便于完成包裹操作，降低实验操作难度。
二、实验中为什么需要用 OCT 包埋剂？
若不使用 OCT 包埋剂，冰冻切片过程易出现多种问题，影响实验效果，具体如下：
组织完整性差：新鲜组织或经预处理的组织质地柔软，直接置于切片机上切割时，易发生碎裂，难以获得完整切片。使用 OCT 包埋剂后，组织被固定在包埋剂形成的支撑结构中，切片时受力均匀，可显著提升切片完整性。
切片平整度不足：即使组织未完全碎裂，未经包埋剂支撑的组织切片，会因自身柔软特性发生皱缩，贴附在载玻片上时难以保持平整，导致后续染色步骤中试剂分布不均，影响实验结果准确性。
染色背景污染：若使用非水溶性包埋剂，其残留物质会与染色试剂结合，导致切片背景出现发黑、发灰等污染现象，掩盖目标观察的细胞或组织结构，导致实验失败。
综上，OCT 包埋剂的核心作用是保障组织可顺利切片、提升切片质量、避免干扰后续实验，是冰冻切片实验的必备试剂，在免疫组化实验室中应用广泛。
三、手把手教你：OCT 包埋剂怎么用？
OCT 包埋剂使用流程可概括为 “浸润→包埋切片→保存” 三个阶段，新手按步骤操作即可掌握，具体如下：
1. 前期浸润：保障组织充分结合包埋剂
包埋前需先对组织进行蔗糖脱水处理（目的是去除组织内水分，防止冰冻时形成冰晶破坏组织结构）。以爱必信 OCT 包埋剂常规使用流程为例：
第一步：取出浸泡在蔗糖溶液中的组织，放入 “20g/L 蔗糖与 OCT 包埋剂按 1:1 体积比混合的溶液” 中，在室温环境下浸泡 2 小时，使组织逐步适应包埋剂环境，实现初步浸润。
第二步：将组织转移至纯 OCT 包埋剂中，室温浸泡 4 小时；随后更换新的纯 OCT 包埋剂，继续在室温下浸泡 6 小时，确保包埋剂充分渗透组织，实现紧密包裹。
2. 包埋切片：精准操作保障切片质量
第三步：将充分浸润的组织放置于切片机托物台上，滴加少量 OCT 包埋剂固定组织（需注意确认组织切面位置与包埋方向，确保切片可获取目标组织区域），随后将托物台放入恒冷箱切片机（常规设定温度为 -22℃）。
第四步：待 OCT 包埋剂与组织完全冻结硬化后，启动切片机进行切片，常规设定切片厚度为 10μm（可根据实验需求调整）；将切好的切片轻轻贴附在预处理后的载玻片上。
3. 后续保存：避免组织变质影响实验
切好的切片需及时放入 -20℃冰箱保存，防止组织变质；对于未完全切片的 OCT 包埋块，需做好标记（注明组织名称、处理日期等信息），放入冻存管后转移至 -80℃环境冷冻保存，便于后续继续切片使用。
四、避坑指南：新手最容易犯的 3 个错误，别踩！
1. 缩短浸润时间：导致包埋不牢固
部分实验人员为节省时间，会缩短组织在 OCT 包埋剂中的浸泡时间（如将 6 小时浸泡时间缩短至 3 小时），造成包埋剂未充分渗透组织，切片时易出现组织与包埋剂分离的情况，导致切片难以完整获取或出现碎裂。需严格按流程保证浸泡时间，这是保障切片成功的基础。
2. 操作不当产生气泡：影响切片完整性
滴加 OCT 包埋剂时若速度过快，易混入空气形成气泡。气泡会夹在组织与包埋剂之间，切片过程中气泡所在位置的组织会出现缺损，形成 “孔洞”，影响后续观察。正确操作方式为：缓慢滴加包埋剂，滴加完成后轻轻晃动托物台，促使气泡上浮排出，再进行冷冻操作。
3. 新鲜组织处理延迟：导致组织质量下降
新鲜组织切除后，建议在 30 分钟内完成包埋切片操作。若放置时间过长，组织会发生变质、质地变硬，即使使用 OCT 包埋剂，也会影响切片质量。若无法及时处理，可采用以下两种应急方式：
方法 1：将组织经液氮快速冷冻后，转移至 -80℃冰箱保存；
方法 2：先用固定液对组织进行固定处理，再经蔗糖脱水后，开展 OCT 包埋操作。
五、常见疑问：这些问题你肯定也想问
1. 不同品牌的 OCT 包埋剂，用法是否一致？
基本一致。以爱必信 abs9756-110mL 与其他品牌相比，核心成分均为聚乙二醇与聚乙烯醇，作用原理相同，因此包埋流程（浸润、冷冻、切片）大致一致。仅在部分细节上可能存在差异（如部分品牌建议的浸泡时间略有缩短），具体操作需参考对应产品说明书。
2. 剩余的 OCT 包埋剂如何保存？是否会过期？
爱必信 abs9756-110mL 款 OCT 包埋剂保存条件简便，在室温环境下保存即可，无需低温储存，可避免低温导致的结冰问题。产品有效期为 2 年（自生产日期起计算），未开封且无污染的情况下，室温保存可保障有效期内正常使用；开封后需尽快使用，每次使用后需盖紧瓶盖，防止灰尘污染。
3. 能否不使用 OCT 包埋剂，直接对组织进行冷冻切片？
除质地极硬的组织（如骨骼）外，不建议直接冷冻切片。大部分软组织（如肝脏、肾脏、脑组织等）直接冷冻时，内部水分会形成冰晶，破坏细胞与组织结构，导致切片完整性差，且细胞形态受损，无法满足后续实验需求。OCT 包埋剂可减少冰晶形成，保护组织结构，因此必须使用。
总结
OCT 包埋剂虽为实验中的辅助试剂，但对冰冻切片质量起着关键作用，可有效解决组织难切片、切片质量差、干扰后续实验等问题。实验人员只需掌握 “充分浸润、规范包埋、及时保存” 的核心操作要点，即可顺利完成包埋切片操作，为后续实验提供高质量样本，保障实验顺利开展。
本文章由AI生成，仅用于科普参考。
名称
货号
规格
OCT包埋剂
abs9756-110mL
110mL
Series S Sensor Chip CM5-1-pack
29104988
1片
Series S Sensor Chip CM5, 10-pack
29149603
10片
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